Cátedra de Clínica Médica – Facultad de Ciencias Médicas – Universidad Nacional de Rosario
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3º PREMIO
ESTUDIO DEL EFECTO DEL CATIÓN CALCIO SOBRE EL PUNTO ISOELÉCTRICO DE LA FOSFATASA ALCALINA INTESTINAL DE RATA.
Traverso, Aneley. Asesor: Rigalli, Alfredo.
Laboratorio de Biología Ósea. Facultad de Ciencias Médicas Universidad Nacional de Rosario.
La fosfatasa alcalina intestinal (IAP) participa en la absorción de ésteres fosfóricos y se liga al calcio (Ca++). Esta unión produce modificación de su actividad, produciendo inhibición no competitiva cuando la concentración de Ca++ supera 20 mM, acompañado de agregación molecular. El objetivo de este trabajo fue investigar modificaciones del punto isoeléctrico (pI) de la IAP inducido por la presencia de Ca++ en relación con su actividad enzimática.
Se purificó la enzima a partir de intestino de rata y se la trató in Vitro con 0, 0.1, 1, 5, 10, 50 y 100 mM Ca++. Se realizó isoelectroenfoque (IEF) en geles de poliacrilamida en gradiente de pH 3.5-9.5 y Western Blot. Luego de la corrida se obtuvieron imágenes digitales de los resultados de ambos métodos. Se determinó la actividad enzimática en el gel por medida de la densidad óptica del precipitado de fosfato cobaltoso producido por la IAP. La modificación en el punto isoeléctrico se estimó por el cambio en la distancia de migración de la enzima desde el punto de siembra, tanto en geles como en la membrana de nitrocelulosa. La actividad enzimática aumentó en función de la concentración de Ca++ hasta 10 mM y luego decreció significativamente (ANOVA P